| CREG基因敲除小鼠胚胎干细胞的筛选及鉴定 |
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| 引用本文： | 田孝祥,张剑,陶杰,孙鸣宇,闫承慧,韩雅玲.CREG基因敲除小鼠胚胎干细胞的筛选及鉴定[J].现代生物医学进展,2012,12(32):6221-6224. |
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| 作者姓名： | 田孝祥 张剑 陶杰 孙鸣宇 闫承慧 韩雅玲 |
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| 作者单位： | 沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重点项目(81130072);国家自然科学基金面上项目(81070097);国家科技部973前期项目(2011CB512111);辽宁省科技攻关项目(2010225036) |
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| 摘 要： | 目的:为阐明E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)在发育过程中的作用,本研究拟通过高浓度药物筛选获得基因敲除的小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)。方法:用0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0mg/ml、2.5 mg/ml及3.0 mg/ml 6个浓度的G418培养CREG杂合型(CREG其中一个等位基因被新霉素抗性neo基因替代)小鼠ESC 2周,确定最佳的G418筛选浓度。挑取该浓度下存活的ESC克隆进行扩增。将每个ESC克隆一半冻存,另一半贴壁培养。待ESC生长至80%融合后分别提取基因组DNA和蛋白。PCR方法扩增CREG基因明确基因组中是否存在CREG基因,WesternBlot方法鉴定是否有CREG蛋白表达。结果:确定2.0 mg/ml G418为最佳的筛选浓度。在该浓度下,共获得存活的克隆10个,PCR证实C2及C7克隆基因组中没有CREG基因,Western Blot证实C2及C7无CREG蛋白表达。结论:成功获得CREG基因敲除的小鼠ESC 2株,为深入研究CREG功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | CREG 基因敲除 胚胎干细胞 |
Selection and Identification of Mouse Embryonic Stem Cells with CREG Gene Knock Out |
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| TIAN Xiao-xiang,ZHANG Jian,TAO Jie,SUN Ming-yu,YAN Cheng-hui,HAN Ya-ling.Selection and Identification of Mouse Embryonic Stem Cells with CREG Gene Knock Out[J].Progress in Modern Biomedicine,2012,12(32):6221-6224. |
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| Authors: | TIAN Xiao-xiang ZHANG Jian TAO Jie SUN Ming-yu YAN Cheng-hui HAN Ya-ling |
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| Institution: | △(Department of Cardiology,Cardiovascular Research Institute of PLA,General Hospital of Shenyang Military Region,Shenyang,Liaoning,110840,China) |
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