| 拟态弧菌VMH蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 肖宁,曹际,孔令严,周昊,陶会竹,陶丽寒,李槿年. 拟态弧菌VMH蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备[J]. 中国微生态学杂志, 2016, 0(7) |
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| 作者姓名： | 肖宁 曹际 孔令严 周昊 陶会竹 陶丽寒 李槿年 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学动物科技学院,安徽农业大学动物科技学院,安徽农业大学动物科技学院,安徽农业大学动物科技学院,安徽农业大学动物科技学院,安徽农业大学动物科技学院,安徽农业大学动物科技学院 |
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| 摘 要： | 目的实现拟态弧菌热不稳定性溶血素(VMH)的原核表达,制备兔抗VMH蛋白的多克隆抗体。方法根据GenBank上已有的拟态弧菌vmh基因序列,设计并合成引物,通过PCR方法扩增vmh基因。PCR纯化产物酶切后,定向插入到PET-32a表达载体构建重组表达质粒PET-32a-vmh。重组表达质粒转化至E.coli Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下进行VMH蛋白表达。SDS-PAGE分析重组VMH蛋白(rVMH)的表达形式,并分别采用兔血平板扩散法和Western blot检测其溶血活性和免疫反应性。用纯化的rVMH蛋白免疫新西兰大白兔,3次免疫后采集免疫血清,采用饱和硫酸铵分级沉淀结合亲和层析法纯化多克隆抗体,并检测其纯度与效价。结果重组表达质粒PET-32a-vmh诱导表达后,经SDS-PAGE分析发现分子量约为77.8kDa的rVMH蛋白主要以包涵体形式表达,该蛋白经变性复性后具有溶血活性和免疫反应性。兔抗rVMH蛋白的多克隆抗体经纯化后,其纯度达95%,ELISA效价为1∶26843545600,琼扩效价为1∶32。结论成功制备了rVMH蛋白及其多克隆抗体,为进一步采用噬菌体肽库筛选技术鉴定VMH蛋白表位提供了物质基础。
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| 关 键 词： | 拟态弧菌；VMH蛋白；原核表达；多克隆抗体 |
Prokaryotic expression of VMH protein of Vibrio mimicus and preparation of its polyclonal antibody |
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