转录因子DEC1和DEC2通过Ebox元件下调大鼠Gclc基因的表达

为研究Ebox元件在谷氨酸 半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate cysteine ligase catalytic subunit，GCLC)基因表达中的地位，构建含Gclc上游5.9 kb调控序列，及突变Ebox（-3 853～ -3 848）的萤火虫荧光素酶报道载体.转染大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（L2），比较野生与突变报道载体的转录活性.共转染野生型载体与转录因子分化型胚胎软骨发育基因1/2（differentiated embryo chondrocyte expressed gene1/2，DEC1/2）真核表达载体，检测DEC1/2对Gclc转录活性的影响；电泳迁移率（electrophoretic mobility shift assays, EMSA）和超级迁移率实验（supershift assay）检测Ebox元件是否与DEC1/2特异结合.蛋白免疫印迹技术检测Dec1/2过表达对Gclc表达的影响. 结果显示，载体构建符合预期；突变Ebox元件可显著上调Gclc荧光素酶活性(P<0.01)；共转染DEC1/2表达载体显著下调Gclc荧光素酶活性(P<0.01)；EMSA证实Ebox元件(－3 853～－3 848）与核蛋白结合，且特异性强；超级迁移率显示，结合的核蛋白有转录因子DEC1、DEC2；Western 印迹结果显示，DEC1/2的表达明显下调Gclc的内源性表达.结果提示，转录因子DEC1与DEC2具有Gclc表达抑制活性，可能与Ebox（－3 853～－3 848）有关.

DEC1 and DEC2 Down-regulate the Expression of Rat Gclc through Ebox element