| 靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制 |
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| 引用本文： | 吕延成,潘晓瑜,周丹丹,袁俊杰,黄畅.靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制[J].中国生物化学与分子生物学报,2013,29(8):759-766. |
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| 作者姓名： | 吕延成 潘晓瑜 周丹丹 袁俊杰 黄畅 |
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| 基金项目： | 贵州省科学技术基金（黔科合J字No.［2008］2313号）和贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目（黔省专合字No.(2009）122号）资助 |
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| 摘 要： | 按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则，针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2, HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo．通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞 (human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2．采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平，终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度，四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果．结果显示，UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳，同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect, CPE)，降低上清液中的病毒感染滴度，提高细胞的生存率，抑制UL27基因的蛋白表达．提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达，抑制HSV-2在HEK293细胞中复制．
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| 关 键 词： | RNA干扰 Ⅱ型单纯疱疹病毒 UL27 基因 |
| 收稿时间： | 2013-01-28 |
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