| 巴西固氮螺菌Yu62glnB基因的克隆及其功能分析 |
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| 引用本文： | 李周华,陈三凤,李季伦.巴西固氮螺菌Yu62glnB基因的克隆及其功能分析[J].遗传学报,2001,28(10):964-970. |
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| 作者姓名： | 李周华 陈三凤 李季伦 |
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| 作者单位： | 中国农业大学生物学院和国家重点实验室, |
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| 基金项目： | 国家863高科技计划(863-101-03-04-02)和国家自然科学基金(30070407)资助项目 |
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| 摘 要： | 通过原位杂交从巴西固氮螺菌Yu62的基因文库中，筛选到glnB基因的阳性克隆，将3.7kb/EcoRI PstI的阳性克隆亚克隆到pUC19中，进行了全序列分析，其在GenBank中的登记号是AF323960。DNA序列分析表明该阳性克隆含有完整的glnB基因，glnB基因下游是编码谷氨酰胺合成酶（GS）的glnA基因，glnB基因上游是一个编码未知蛋白的ORF。glnB基因编码区长336bp，编码112个氨基酸，与肺炎克氏杆菌、大豆慢生根瘤菌、豌豆根瘤菌及大肠杆菌在氨基酸顺序的同源性分别高达71%、77%、79%和69%。将卡那霉素抗性片段（Km-cassette)插入glnB基因的BglII位点，通过三亲杂交法将其引入到巴西固氮螺菌Yu62中，通过同源重组，获得GlnB^-突变株（glnB::Km）。为进一步分析glnB基因的功能，将glnB基因的编码区（339bp）构建在pVK100中，置于Km启动子下组成型表达，形成重组质粒pVK-II。将重组质粒pVK-II转入到GlnB^-突变株，构建成互补株C-glnB(glnB:Km/glnB)。对GlnB^-突变株和互补株的固氮酶活性和生长性能的测定表明，GlnB^-突变体无固氮酶活性，即表型为Nif^-；而互补株像野生型菌株一样具有固氮酶活性。突变株、互补株及野生型在菌落生长速度上基本相同。将含有glnB基因的重组质粒pVK-II分别转移到野生型Yu62菌株和具有一定抗铵能力的DraT^-突变标中，使glnB基因的拷贝数增加，并进一步比较它们的固氮酶活性，结果表明多拷贝的glnB基因能显著提高固氮酶活性。
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| 关 键 词： | 巴西固氮螺菌Yu62 glnB基因 PⅡ蛋白 GlnB^－突变标 基因克隆 功能 |
| 文章编号： | 0379-4172(2001)10-0964-07 |
| 修稿时间： | 2001年3月20日 |
Cloning and Functional Analysis of glnB from Azospirilum brasilense Yu62 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Azospirillum brasilense Yu62 glnB gene P II protein GlnB - mutant |
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