黑色素及谷胱甘肽通过抑制NF-κB途径的激活可有效抑制H 5N1禽流感病毒感染

我国是H5N1高致病性禽流感频发区.为筛选天然药物用于H5N1禽流感的防治并研究其抗病毒感染的作用机制，本研究选取黑色素及谷胱甘肽（GSH）为候选药物，通过Hoechst 33258荧光染色,观察了禽流感病毒(AIV)感染后的细胞形态变化；细胞凋亡流式细胞术定量分析表明，H5N1 AIV感染可诱导宿主狗肾上皮细胞(MDCK)凋亡，而黑色素及GSH对其具有显著抑制作用(P<0.01)；当20 μg/ml黑色素及10 mmol/LGSH共同作用时,抑制率高达89% (P <0.01)；采用MTT法检测,黑色素及GSH可增强AIV感染后的宿主细胞存活率；病毒血凝素(Ｈa)基因的RT-PCR检测结果表明，黑色素及GSH可显著降低AIV在宿主细胞内的增殖(P<0.01)；一氧化氮（NO）毛细管电泳（CE）激光诱导荧光检测显示，黑色素及GSH均可显著降低病毒感染诱导宿主细胞内的NO释放量(P<0.05)；RT-PCR技术结合ELISA方法,分别分析了病毒感染后宿主细胞的诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、环氧化酶(cyclooxygenase-2, COX-2)及核因子κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB）在mRNA和蛋白水平表达的差异.结果表明，黑色素及GSH可抑制病毒感染诱导的iNOS与COX-2的基因及蛋白的表达 (P<0.05)，并进而抑制NF-κB途径的激活(P<0.01)，从而可有效抑制H5N1 AIV感染.