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凝血因子FⅧA链基因第1内含子内顺式调节元件的鉴定
引用本文:黄丽君,李慧,刘晗,郭黎媛,高利波,刘新华,蔡望伟,李刚.凝血因子FⅧA链基因第1内含子内顺式调节元件的鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报,2007(5).
作者姓名:黄丽君  李慧  刘晗  郭黎媛  高利波  刘新华  蔡望伟  李刚
作者单位:北京大学医学部生物化学与分子生物学系,北京大学医学部生物化学与分子生物学系,北京大学医学部生物化学与分子生物学系,北京大学医学部生物化学与分子生物学系,北京大学医学部生物化学与分子生物学系,北京大学医学部生物化学与分子生物学系,海南医学院生化教研室,北京大学医学部生物化学与分子生物学系 北京100083 海南医学院生化教研室,海口570102,北京100083,北京100083,北京100083,北京100083,北京100083,海口570102,北京100083
基金项目:国家教育部博士点项目基金(No.20030001028),国家自然科学基金(No.30060037及30671856),教育部科学技术研究重点项目(No.03147),海南医学院重点学科项目(海医科研部[2005-46])~~
摘    要:探讨FⅧA基因表达的分子机制.凝胶阻滞实验(EMSA)结果证明,FⅧA基因第1内含子5′区的前12碱基与转录因子结合并由此调控基因表达.FⅧA基因第1内含子第12位碱基由C突变为A(内含子1( 12)C→A)导致与转录因子结合能力降低.构建不同的荧光素酶表达质粒Luc1、Luc2、Luc3、Luc4、Luc5、Luc6,并转染U937细胞和HepG2细胞.结果显示,如果Luc5(具有最高表达活性)的内含子1( 12)由C突变为A,启动子活性显著降低.与Luc5相比,突变后的Luc5的活性分别下降了52·9%(U937,P<0·01)和47·6%(HepG2,P<0·01).将Luc5与PN3 Sp1共同转染U937细胞和HepG2细胞后,Luc5的荧光素酶活性分别提高了42·4%(U937,与Luc5单独转染比较P<0·01)和54·9%(HepG2,与Luc5单独转染比较P<0·01),而突变后的Luc5(Mut)与PN3 Sp1共同转染则没有明显的改变.表明转录因子Sp1在FXA基因表达的重要性.这些结果也表明,内含子在FⅧA基因表达过程中起重要作用,为遗传性凝血因子Ⅷ发病机理的研究提供了新的证据.

关 键 词:凝血因子Ⅷ(FⅧ)内含子  点突变  表达调控
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