| 靶向DENN-SV基因的shRNA真核表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 骆振华,李锦成,张秀梅,冯卓.靶向DENN-SV基因的shRNA真核表达载体的构建[J].中国细胞生物学学报,2013(1):36-40. |
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| 作者姓名： | 骆振华 李锦成 张秀梅 冯卓 |
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| 作者单位： | 辽宁医学院附属第一医院乳腺外科;辽宁医学院附属第一医院心内科 |
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| 基金项目： | 辽宁省科技厅社会发展攻关计划(批准号:2010225034)资助的课题~~ |
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| 摘 要： | 该研究根据DENN-SV序列及shRNA设计原则,设计四个靶点序列,退火后用DNA重组技术与pRNAi-U6.1/Neo空载体连接,转化到感受态E.coli中。扩增菌株,抽提质粒,进行酶切、DNA测序鉴定。将重组的真核表达载体转染人乳腺癌MCF-7细胞并使用RT-PCR及Western blot检测其抑制DENN-SV mRNA表达的效率,以MTT法绘制生长曲线。测序结果与设计序列相同,并已成功转染进入人乳腺癌MCF-7细胞,可见GFP(绿色荧光蛋白)表达,且都具有抑制作用(P<0.01),DS-1组的抑制效果最好;MTT法绘制生长曲线结果表明,实验组经该载体转染后细胞增殖程度显著减少(P<0.05)。该研究应用RNAi技术成功构建了小干扰RNA重组体,为进一步研究乳腺癌基因治疗奠定了基础。
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| 关 键 词： | DENN-SV 短发夹RNA RNA干扰 MCF-7细胞系 |
Construction of shRNA Eukaryotic Expression Vector Targeting DENN-SV Gene |
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| Authors: | Luo Zhenhua Li Jincheng Zhang Xiumei Feng Zhuo |
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| Institution: | 1(1Department of Breast Surgery,First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University,Jinzhou 121000,China; 2Department of Cardiology,First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University,Jinzhou 121000,China) |
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| Abstract: | |
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