| 单克隆人胰腺干细胞分离培养体系的建立 |
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| 引用本文： | 效梅,安立龙,葛欣,窦忠英.单克隆人胰腺干细胞分离培养体系的建立[J].分子细胞生物学报,2008,41(6). |
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| 作者姓名： | 效梅 安立龙 葛欣 窦忠英 |
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| 作者单位： | [1]广东海洋大学农学院动物医学系,广东湛江524088 [2]西北农林科技大学国家干细胞工程技术中心陕西分中心,陕西杨凌712100 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划资助项目
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国家重点基础研究发展规划项目
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国家自然科学基金资助项目
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教育部重点资助项目
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陕西省重点攻关项目
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广东省自然科学基金资助项目
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广东省教育科学基金资助项目
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| 摘 要： | 本研究探讨了建立单克隆人胰腺干细胞分离培养体系及单克隆人胰腺干细胞系．对一些影响干细胞增殖的因素进行了分析。无菌取人流产胎儿胰腺组织，切碎至1mm3，0．1％ Ⅳ型胶原酶消化，低糖DMEM、10％FBS、3．7g／LNaHCO3、0．08g／L青霉素及0．1g/L链霉素培养液贴壁培养细胞，2．5g／L胰蛋白酶＋0．4g／LEDTA消化传代。克隆环筛选单克隆干细胞，培养液中添加10ng／mLEGF．扩增单克隆干细胞。采用核型分析法检测干细胞染色体，MTT法测定干细胞生长曲线。胶原酶消化胰腺组织．获得单个细胞和细胞团。贴壁培养．原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长。胰蛋白酶消化传代，上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化。克隆环筛选，获得单克隆人胰腺干细胞。扩增培养，1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺组织干细胞建系，传50代。染色体核型分析．该干细胞系为正常的二倍体细胞。细胞生长曲线显示培养1—4d，干细胞生长缓慢，5-6d，进入倍增期。培养液中添加15％FBS，干细胞增殖较快。再添加15ng／mLEGF或10ng／mL IGF—Ⅱ．干细胞增殖更快。研究结果表明应用本实验建立的细胞分离培养体系获得了单克隆人胰腺干细胞系。
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| 关 键 词： | 胰腺干细胞 单克隆 分离 扩增 IGF一Ⅱ 人 |
ESTABLISHMENT OF THE ISOLATION AND CULTURE SYSTEM FOR MONOCLONING HUMAN PANCREATIC STEM CELL |
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| Institution: | ~1 Department of Animal Medicine;Agricultural College;Guangdong Ocean University;Zhanjiang;Guangdong 524088;China;~2 Shannxi Branch of National Stem Cell Engineering and Technology Centre;Northwest Sci-Tech University of Agriculture and Forestry;Yangting;Shaanxi 712100;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | FBS EGF |
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