| 人eya2基因小干扰RNA表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 袁斌,丁丽华,熊志红,韩聚强,张浩,王晓辉,杨智洪,叶棋浓.人eya2基因小干扰RNA表达载体的构建及表达[J].生物技术通讯,2008,19(2):181-184. |
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| 作者姓名： | 袁斌 丁丽华 熊志红 韩聚强 张浩 王晓辉 杨智洪 叶棋浓 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850 |
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| 基金项目： | 解放军医药卫生科研项目 |
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| 摘 要： | 目的：设计并构建人eya2（eyes absent2）基因小干扰RNA（siRNA）的真核表达载体，并观察其沉默效果。方法：以人eya2为靶基因，以pSliencer2．1-U6 neo质粒为载体，根据人eya2的cDNA序列，设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列，将其克隆到siRNA表达载体上；转化大肠杆菌DH5Ⅸ菌株，抽提质粒，测序分析；将重组质粒转染人胚肾293T细胞，通过荧光分析、Westemblot和转录活性实验检测其抑制效果。结果：重组体测序结果与目的序列相一致，证明构建了eya2 siRNA真核表达载体；荧光观察表明siRNA能显著减弱细胞中绿色荧光强度，抑制eya2基因表达；Westemblot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性eya2基因表达；转录活性测定表明，构建的siRNA能有效抑制eya2基因表达。结论：构建了eya2 siRNA真核表达载体，该siRNA能有效地抑制eya2基因表达。
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| 关 键 词： | eya2基因 小干扰RNA 表达 转录 |
| 文章编号： | 1009-0002(2008)02-0181-04 |
| 修稿时间： | 2007年6月4日 |
Conctruction and Expression of Small Interference RNA Expression Vectors Targeting Human Gene eya2 |
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| YUAN Bin,DING Li-Hua,XIONG Zhi-Hong,HAN Ju-Qiang,ZHANG Hao,WANG Xiao-Hui,YANG Zhi-Hong,YE Qi-Nong.Conctruction and Expression of Small Interference RNA Expression Vectors Targeting Human Gene eya2[J].Letters in Biotechnology,2008,19(2):181-184. |
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| Authors: | YUAN Bin DING Li-Hua XIONG Zhi-Hong HAN Ju-Qiang ZHANG Hao WANG Xiao-Hui YANG Zhi-Hong YE Qi-Nong |
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| Institution: | ( Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100850, China) |
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