| 摘 要： | 五氧化二钒（V2O5）是一种常见的工业毒物和环境污染物。为了进一步验证钒的致畸性，并为揭示其发育毒性的作用机理提供依据。本在大鼠致畸试验的基础上，应用细胞微团培养方法他钒对大鼠胚胎芽细胞在体内外增殖和分化的影响。体外实验：从妊娠d13的孕鼠中分离出胚胎，取前肢芽，制成细胞悬液（21×10^7cell/mL），取10μL置于培养板上成一微团，于高湿、37℃的CO2孵箱中预培养2h，然后缓慢加入不同剂量的V2O5溶液（勿冲散微团，对照加培养基），培养5d。体内实验：取鼠妊娠d12时，经i.p，以不同剂量的V2O5处理，16h后处死、取胚胎肢芽细胞培养。然后，固定细胞，分别采用苏木精染色和阿利新兰染色，前经甲醇脱色后以酶标光密度值反映细胞增殖情况；后由镜检每一微团中天蓝色的分化落数判断对细胞分化的抑制作用。体外试验结果显示，钒剂量在5．0μmol／L，以上时细胞集落数明显下降，光密度则在7．5μmol／L以上时明显下降，均呈明显的剂量－反应关系（Table1)，说明钒对肢芽细胞增殖和分化都有抑制作用，但细胞增殖和分化的两条抑制曲线明显不同（Fig.1)，其中IC50分别为13．14和4．77μmol／L。按Flint及Reanaault提出的判定标准，钒为肢芽细胞的特异性分化抑制物，与大鼠致畸试验的结果一致。体内染毒对胚胎肢芽细胞增殖的影响与体外染毒无明显差别，但对抑制细胞分化则差别显，2mg/kg V2O5组的集落数已减少近50％。已在抑制胚肥形成过程中的细胞增殖和分化可导致发育异常。钒在对肢芽产殖无明显影响时即可影响细胞的分化，表明：至少在较低剂量时，抑制胚胎细胞分化可能是钒致畸机理的最初形式；提高剂量后，其发育毒性除表现在影响细胞分化外，还可能表现在抑制细胞增殖。
|
