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| 共表达磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和烟酸转磷酸核糖激酶提高重组大肠杆菌发酵木糖产丁二酸 | |
| 作者姓名： | 陈旭 梁丽亚 刘嵘明 万青 吴明科 姜岷 |
| 作者单位： | 南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(21076105);国家重点基础研究发展计划(973计划)(2009CB724701);国家高技术研究发展计划(863计划)(2011AA02A203);教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-12-0732);江苏高校优势学科建设工程;江苏省高校自然科学研究项目(11KJB530003) |
| 摘 要： | 野生型E.coli K12能够在厌氧条件下代谢木糖生长,但是丁二酸不是其主要的代谢终产物。而在E.coli BA203(Δldh A,Δpfl B,Δppc)中,通过过量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶(PCK),即E.coli BA204,使其能够在厌氧条件下利用木糖发酵生产丁二酸。为了进一步提高生物量及丁二酸的产量,通过过量表达烟酸转磷酸核糖激酶(NAPRTase)提高NAD(H)的生成,从而提高木糖代谢速率。因此采用2种方法构建了共表达烟酸转磷酸核糖激酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶的基因工程菌,即E.coli BA208(BA203/p Trc99a-pnc B-pck)和E.coli BA209(BA203/p Trc99a-pck-trc-pnc B)。通过实验发现:厌氧发酵72 h,BA209消耗16.7 g/L木糖,生成15.8 g/L丁二酸,乙酸含量有所降低,而丙酮酸的量几乎不变。BA209中NAD(H)总量和ATP含量较BA208和BA204都有明显的提高。这为考察NAD(H)和ATP 2种辅因子对重组大肠杆菌利用木糖合成丁二酸的影响提供了研究平台。 |
| 关 键 词： | 磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶 烟酸转磷酸核糖激酶 大肠杆菌 丁二酸 木糖 |
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