大肠杆菌脯氨酸基因的体内克隆及表达

用含mini－Mu的多拷贝质粒pEG5005体内克隆了大肠杆菌脯氨酸基因ProA⁺B⁺，其Pr0^＋克隆频率为1．46×1O^-3／Kan r转导子。遗传和生化分析表明这些克隆的Pr0^＋基团位于质粒上，用生长谱法对若干克隆子作了脯氨酸产量测定，但未检测出脯氨酸的积累。通过细胞内诱变Pro^＋克隆pPR3获得的去反馈抑制突变质粒pPR7，在脯氨酸Pr0AB基因缺失的寄主中可积累0．35mg／ml的脯氨酸，将此克隆转移至产1mg／ml脑氨酸的受体菌，其产酸量达2．5mg／ml，比受体高2．5倍，比供体提高了7倍，文中还对pEG5005和克隆pPR3作了内切酶分析。