人生长激素释放因子基因的合成和克隆

本文报道人生长激素释放因子(Leu²⁷，Met⁴⁴)hGRF(1-44)基因的合成和克隆。选用大肠杆菌高效表达所偏爱的简并密码子，用计算机辅助设计合成基因的顺序，用固相亚磷酸酰胺法合成了hGRF的6个寡聚核苷酸片段，长度分别为39至51个桉苷酸，总共141个碱基对。通过酶促连接反应构建完整的hGRF基因，并直接克隆到pUC-19质粒中，克隆的宿主菌为E．Coll JM83。通过抗性筛选、阳性标记筛选、限制酶分析和分子杂交确定阳性克隆株。用M13双脱氧末端终止法对克隆基因序列分析，证实台成和克隆的hGRF基因序列完全正确。