| 圣路易斯脑炎病毒NS2B-NS3蛋白酶的原核表达及其抑制剂的筛选 |
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| 引用本文： | 周婷婷,高梦茹,杜梦繁,于凡,冯磊.圣路易斯脑炎病毒NS2B-NS3蛋白酶的原核表达及其抑制剂的筛选[J].微生物学报,2019,59(4):668-677. |
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| 作者姓名： | 周婷婷 高梦茹 杜梦繁 于凡 冯磊 |
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| 作者单位： | 江南大学无锡医学院, 江苏 无锡 214122,江南大学药学院, 江苏 无锡 214122,江南大学药学院, 江苏 无锡 214122,江南大学无锡医学院, 江苏 无锡 214122,江南大学无锡医学院, 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 中央高校基本科研业务费专项资金（JUSRP11863）；国家自然科学基金（81800430） |
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| 摘 要： | 【目的】圣路易斯脑炎病毒(St. Louis encephalitis virus,SLEV)属于黄病毒科,是一种单股正链RNA病毒。黄病毒编码的非结构蛋白NS3在病毒复制以及多聚蛋白加工过程中起着重要作用,NS2B是其发挥作用的重要辅助因子。因此,NS2B-NS3蛋白酶复合物是抗病毒药物的重要靶标。本研究旨在构建SLEV NS2B-NS3蛋白酶的原核表达系统并建立其抑制剂的高通量筛选方法,从而发现其小分子抑制剂。【方法】通过PCR扩增SLEVNS2B-NS3蛋白的编码区,构建原核表达质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-thiogalactoside)诱导得到可溶性的NS2B-NS3蛋白,并用镍亲和层析方法进行纯化;基于荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer)技术检测NS2B-NS3蛋白酶活性,建立其抑制剂的高通量筛选平台。【结果】SLEV NS2B-NS3蛋白酶纯化程度高达95%以上,基于酶活测定的抑制剂筛选平台准确可行。对700多个上市药物进行筛选后,发现原花青素对SLEVNS2B-NS3蛋白酶具有明显的抑制活性。【结论】本研究为SLEVNS2B-NS3蛋白酶抑制剂提供了一种操作方便、高通量的筛选方法,并首次发现了原花青素具有抑制SLEV NS2B-NS3蛋白酶活性的功能,可以作为治疗SLEV感染的潜在靶向药物。
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| 关 键 词： | 圣路易斯脑炎病毒 NS2B-NS3蛋白酶 丝氨酸蛋白酶活性 抑制剂 筛选 |
| 收稿时间： | 2018/6/3 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/8/16 0:00:00 |
Expression and inhibitors screening of St. Louis encephalitis virus NS2B-NS3 protease |
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| Tingting Zhou,Mengru Gao,Mengfan Du,Fan Yu and Lei Feng.Expression and inhibitors screening of St. Louis encephalitis virus NS2B-NS3 protease[J].Acta Microbiologica Sinica,2019,59(4):668-677. |
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| Authors: | Tingting Zhou Mengru Gao Mengfan Du Fan Yu and Lei Feng |
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| Institution: | Wuxi School of Medicine, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China,School of Pharmaceutical Science, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China,School of Pharmaceutical Science, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China,Wuxi School of Medicine, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China and Wuxi School of Medicine, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | St Louis encephalitis virus (SLEV) NS2B-NS3 protease serine protease enzymatic activity inhibitor screen |
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