| 结核分枝杆菌多表位诊断抗原的制备 |
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| 引用本文： | 高健,赵鼎.结核分枝杆菌多表位诊断抗原的制备[J].生物工程学报,2019,35(4):718-725. |
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| 作者姓名： | 高健 赵鼎 |
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| 作者单位： | 1 郑州大学附属儿童医院 检验科，河南 郑州 450000;2 郑州儿童医院 检验科，河南 郑州 450000;3 河南省儿童医院 检验科，河南 郑州 450000,1 郑州大学附属儿童医院 检验科，河南 郑州 450000;2 郑州儿童医院 检验科，河南 郑州 450000;3 河南省儿童医院 检验科，河南 郑州 450000 |
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| 摘 要： | 将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)多个B细胞预测表位串联表达(命名为B102),并初步评价其作为诊断抗原的血清学诊断价值。将MtbPstS1、ESAT6、CFP10、Ag85B、Ag85A及PPE54等6个蛋白的11个B细胞预测表位串联,加入合适的连接臂后全基因合成;将多表位片段插入带有TRX标签的表达质粒中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并利用Ni~(2+)-Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blotting (WB)技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立Mtb抗体检测竞争法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。目的蛋白以包涵体形式存在,其表达量约占菌体总蛋白的31.25%,经纯化及复性后蛋白B102可溶性存在,浓度为3.124mg/mL,纯度为96.71%;WB实验表明目的蛋白能与Mtb阳性血清相应抗体发生反应。对60份Mtb阳性血清及60份Mtb阴性血清进行检测得出其灵敏度为90.00%,特异性为93.33%,阳性预测值为93.10%,阴性预测值为90.32%,符合率为91.67%,McNemer检验的结果提示与"金标准"诊断结果无差异,Kappa=0.833,提示两种方法诊断结果一致性优异。原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的Mtb多表位诊断抗原,作为诊断抗原可以应用于Mtb的血清学检测中。
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| 关 键 词： | 多表位抗原，结核分枝杆菌，原核表达，层析纯化，血清学诊断 |
| 收稿时间： | 2018/9/21 0:00:00 |
Preparation of multi-epitope recombinant diagnostic antigen of Mycobacterium tuberculosis |
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| Jian Gao and Ding Zhao.Preparation of multi-epitope recombinant diagnostic antigen of Mycobacterium tuberculosis[J].Chinese Journal of Biotechnology,2019,35(4):718-725. |
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| Authors: | Jian Gao and Ding Zhao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | multi-epitope recombinant diagnostic antigen Mycobacterium tuberculosis prokaryotic expression chromatography purification serological diagnosis |
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