利用λRed重组系统敲除伤寒沙门氏菌rfaH基因 |
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作者姓名: | 姜娜 王芃 王艳春 袁盛凌 展德文 陶好霞 王令春 刘纯杰 |
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作者单位: | 军事医学科学院,生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京,100071 |
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摘 要: | 目的:利用λRed重组系统敲除伤寒沙门氏菌的rfaH基因。方法:以伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi Ty2,S.ty2)基因组为模板扩增得到的同源臂,与两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段共同构建同源重组载体;以重组载体为模板扩增打靶片段,将其转化S.ty2;在抗生素压力和λRed重组系统帮助下,打靶片段和菌体基因组发生同源重组,通过卡那抗性筛选得到带有抗性标记的重组菌;转入重组酶表达质粒pCP20以去除抗性标记,得到保留单一FRT位点的突变菌株;通过PCR鉴定重组菌,并经透射电子显微镜分析表型。结果:在S.ty2中敲除了rfaH基因,经PCR扩增和序列测定正确;初步的表型分析表明突变体的鞭毛合成显著减少。结论:获得了S.ty2突变株,为将沙门氏菌进一步减毒成为疫苗表达载体奠定了基础。
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关 键 词: | 伤寒沙门氏菌 λRed重组系统 rfaH基因 基因敲除 |
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