人受精蛋白β整联蛋白配体区cDNA的克隆、表达及抗体制备

从人睾丸中抽提mRNA，合成双链cDNA，利用合成的PCR引物扩增受精蛋白β（fertilinβ）的整联蛋白配体区cDNA（hf279)。序列分析表明，该区编码93个氨基酸，与文献报道安全相同。将hf29插入质粒pGEX－4T－2，构建pGEX-hf279表达质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），表达菌株经IPTG诱导，可产生大量可溶性的表达蛋白GST－HF93。SDS－PAGE分析表明融合蛋白表观分子量为38kD，其含量占菌体可溶性蛋白的50％以上。表达产物经谷胱甘肽转硫酶（GST）亲和层析柱纯化，得到90％以上纯度的凳晤蛋白。融合蛋白经凝血酶切2h可得HF93肽。再经GST新和层析柱去除GST，得到纯度大于80％的HF93肽。将其和SDS－PAGE凝胶上切下的HF03多肽条带一起用于免疫BALB／c小鼠，经ELISA检测，证明获得了较高滴度的抗体。