| 人源性抗TNFα小分子抗体的改构和分析 |
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| 引用本文： | 陈萍,陈常庆,药立波,韩骅,苏成芝.人源性抗TNFα小分子抗体的改构和分析[J].生物化学与生物物理学报,2001,33(1):71-76. |
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| 作者姓名： | 陈萍 陈常庆 药立波 韩骅 苏成芝 |
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| 作者单位： | 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室!西安710032(陈萍，药立波，韩骅，苏成芝)，中国科学院上海生物工程研究中心!上海200233(陈常庆) |
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| 摘 要： | 在获得人源性抗人TNF α单链抗体 (ScFv)基因序列的基础上 ,对ScFv的连接肽部分进行基因改造 ,并构建了Fab抗体基因。改构前后的ScFv分别重组入表达载体pBV2 2 0 ,经 42℃热诱导 ,在E .coliDH5α中表达了ScFv蛋白 ,得到分子量约为 30kD的重组蛋白质 ,改构前后ScFv的表达量分别占菌体总蛋白质的 6 .5 %和13 .8%。同时构建Fab可溶性表达载体并转化非抑制型菌株HB2 15 1,经IPTG诱导 ,在约 5 0kD分子量处呈现一条新生蛋白质条带。从大肠杆菌裂解液中对ScFv进行了复性和层析纯化 ,对Fab基因的表达产物进行了亲和层析纯化 ,并证实 :(1)改构后ScFv在大肠杆菌中的表达量有所提高 ;(2 )改构前后的ScFv与Fab均具有与hTNF α相结合的活性 ,具有GGGGS连接肽的ScFv与hTNF α的亲和常数为 6 .70× 10 4 (mol/L) -1,而改构后具有(GGGGS) 3 连接肽的ScFv的亲和常数提高为 7.2 7× 10 5(mol/L) -1,Fab与hTNF α的亲和常数为 7.6 1× 10 5(mol/L) -1,Fab与改构后ScFv的亲和力无明显差异 ;(3)ScFv与Fab均有中和hTNF α细胞毒的作用 ,具有(GGGGS) 3 连接肽的ScFv与Fab的中和活性基本相同 ,但均明显低于一株鼠源性单抗
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| 关 键 词： | 肿瘤坏死因子α 人源性ScFv抗体 人源性Fab抗体 表达 亲和力 |
Reconstruction and Analysis of A Human Small Molecular Antibody to Tumor Necrosis Factor Alpha |
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| CHEN Ping ,CHEN Chang Qing ,YAO Li Bo ,HAN Hua ,SU Cheng Zhi.Reconstruction and Analysis of A Human Small Molecular Antibody to Tumor Necrosis Factor Alpha[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2001,33(1):71-76. |
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| Authors: | CHEN Ping CHEN Chang Qing YAO Li Bo HAN Hua SU Cheng Zhi |
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| Institution: | CHEN Ping 1,CHEN Chang Qing 2*,YAO Li Bo 1,HAN Hua 1,SU Cheng Zhi 1 |
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