| 浑球红细菌（Rhodobacter sphaeroides）中氢化酶正调节基因hupR的克隆及功能分析 |
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| 引用本文： | 徐冬青,吴永强.浑球红细菌（Rhodobacter sphaeroides）中氢化酶正调节基因hupR的克隆及功能分析[J].生物化学与生物物理学报,2001,33(6):607-614. |
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| 作者姓名： | 徐冬青 吴永强 |
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| 作者单位： | [1]中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所，上海200032 [2]中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，No .39870 0 0 5~~ |
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| 摘 要： | 从光合细菌Rhodobacter sphaeroides基因文库中分离出含有氢化酶基因簇（hup）的粘粒cosmid 1后，亚克隆了R.sphaeroides的氢化酶调节基因hupR，测定了hupR的核苷酸序列，并完成了氢化酶基因簇的部分物理图谱。实验结果表明，hupR基因全长1476bp，编码的HupR基因分子量约为54.031kD(EMBL接受号：A243734)。与R.capsulatus中HupR相比，同源性高达73％。同源性比较结果表明，它属于双组分调节系统中受体蛋白。hupR基因在E.coli中进行了体外表达，纯化后测定得到的HupR蛋白 分子量大小与hupR基因推测的分子量大小一致。通过双交换，将卡那霉素抗性基因插入hupR基因，获得丧失氢化酶活性的hupR^-的突变株，KR5和KR7。hupS∷lacZ融合基因在野生型中的转录表达量是在该突变株中的7－9倍。将hupR基因置于弱启动子pfru下游，构建了质粒pNRC3，并将其导入hupR^-的突变株，可使突变株重新获得氢化酶活性。以上结果说明，HupR蛋白对氢化酶的转录表达起着正调节作用。在HupR蛋白的磷酸化区域进行定点和缺失突变。不影响HupR激活氢化酶基因的表达，推测HupR蛋白是在非磷酸化的状态下起调节作用的。
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| 关 键 词： | hup基因簇 hupR基因 转录 氢化酶 光合细菌 浑球红细菌 |
Isolation and Analysis of hupR Gene Required for the Expression of Hydrogenase in Rhodobacter sphaeroides |
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| XU Dong Qing,WU Yong Qiang.Isolation and Analysis of hupR Gene Required for the Expression of Hydrogenase in Rhodobacter sphaeroides[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2001,33(6):607-614. |
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| Authors: | XU Dong Qing WU Yong Qiang |
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| Institution: | XU Dong Qing,WU Yong Qiang * |
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