Asp^126、Asp^130、Asp^134对人白介素18功能的影响

为研究人白细胞介素18(hIL-18)中一些氨基酸残基对IL－18功能的影响，用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL-18突变体hIL-18D^126N、hIL-18D^130K、hIL-18D^134K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达，3个突变体占菌体总蛋白质的15％－31％以上。SDS－PAGE证实，表达的蛋白质以包含体形式存在。包含体经超声破坏，2mol/L尿素洗涤，8mol/L尿素溶解，Sephadex G-75柱纯化后，纯度均可达95％以上。Western印迹表明3个突变体与野生型hIL-8具有相同的免疫原性。纯化的突变体蛋白质经复性后，以诱导人外周血单个核细胞（PBMC）产生于干扰素（IFN－γ）的能力为指标检测其活性，结果显示3个突变体的生物学活性分别为野生型IL－18的32％、8％、10％，表明hIL-18中126、130、134位的天冬氨酸（Asp)对其功能是必需的。