| 斑点叉尾鮰NK-lysin基因的cDNA克隆及融合表达质粒构建 |
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| 引用本文： | 张卓娜,陶妍.斑点叉尾鮰NK-lysin基因的cDNA克隆及融合表达质粒构建[J].生物技术通报,2012,0(9):166-172. |
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| 作者姓名： | 张卓娜 陶妍 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学食品学院,上海,201306 |
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| 基金项目： | 上海市教育委员会重点创新基金项目，上海市科促会联盟计划项目，上海市宝山区科学技术委员会科研基金 |
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| 摘 要： | 以斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)NK-lysin-type1的成熟肽为研究目标,首先通过RT-PCR和巢式PCR从斑点叉尾鮰的鳃中克隆到编码NK-lysin成熟肽的基因,该基因编码由92个氨基酸残基组成的成熟肽;6个高度保守的半胱氨酸残基位于成熟肽内,它们被推测与NK-lysin的抗菌活性有关。为了进一步构建原核表达系统用于成熟肽的表达,pET-32a(+)被选择作为融合表达质粒,该质粒含有1个trxA融合头基因,与目的片段mNK-lysin连接后形成融合基因trxA-mNK-lysin,进而有助于在工程菌E.coliBL21(DE3)中的可溶性融合表达。通过PCR、EcoR I和HindⅢ双酶切处理以及DNA测序鉴定,证明pET-32a-mNK-lysin重组融合表达质粒已经被成功构建;将其转化至工程菌E.coliBL21(DE3)后的测序结果表明该重组质粒未发生任何DNA变异。
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| 关 键 词： | 斑点叉尾鮰 抗菌肽 NK-lysin cDNA克隆 融合表达质粒 |
cDNA Cloning and Construction of Fusion Expression Plasmid for NK-lysin Gene from Channel Catfish ( Ictalurus punctatus ) |
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| Zhang Zhuona
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Tao Yan.cDNA Cloning and Construction of Fusion Expression Plasmid for NK-lysin Gene from Channel Catfish ( Ictalurus punctatus )[J].Biotechnology Bulletin,2012,0(9):166-172. |
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| Authors: | Zhang Zhuona Tao Yan |
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| Institution: | Zhang Zhuona Tao Yan(College of Food Science and Technology,Shanghai Ocean University,Shanghai 201306) |
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