| cDNA芯片阳性对照的制备及在芯片敏感性分析中的应用 |
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| 引用本文： | 陈忠斌,杨静,王升启.cDNA芯片阳性对照的制备及在芯片敏感性分析中的应用[J].生物技术通讯,2002,13(5):334-337. |
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| 作者姓名： | 陈忠斌 杨静 王升启 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30000146) |
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| 摘 要： | cDNA芯片是一种高通量基因表达谱分析技术，在生理病理条件下细胞基因表达谱分析，新基因发现和功能研究等方面具有广阔应用前景。CDNA芯片阳性对照的选取以及CDNA芯片检测敏感性是芯片成功应用的关键问题之一。以在系统发育上与人类基因同源性小的荧火虫荧光素酶基因材料，制备了用于人类和其他动物基因表达谱CDNA芯片的通用型阳性对照探针和相应的mRNA参照物，经反转录对mRNA参照物进行Cy3荧光标记并与DNA芯片杂交后发现，mRNA参照物能特异性地与荧光酶基因cDNA片断杂交，而与人β-肌动蛋白基因，人G3PDH基因以及λDNA/HINDⅢ无杂交反应。把mRNA参照物以不同比例加入HepG2总RNA中，以反转录荧光标记后与CDNA芯片杂交，结果发现当总RNA中的MRNA含量为1/10^4稀释（即mRNA分子个数约为10^8个）时，CDNA芯片基本检测不出mRNA标记产物的杂交信号。而且，cDNA芯片检测的信号强度与芯片上固定的探针浓度密切相关，当探针浓度为2g/L时，杂交信号最强，随着探针浓度下降芯片的杂交信号趋于减弱。CDNA芯片通用型阳性参照物的制备以及应用于CDNA芯片检测敏感性研究为CDNA芯片应用于人和其他动物基因表达谱高通量分析和新基因功能研究提供了技术基础和理论依据。
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| 关 键 词： | cDNA芯片 阳性对照 制备 敏感性分析 应用 基因表达谱 荧光素酶基因 |
| 文章编号： | 1009-0002(2002)05-0334-04 |
| 修稿时间： | 2002年3月25日 |
Preparation of an universe normalization control for cDNA microarray and its application in the sensitivity analysis of cDNA microarray |
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| CHEN Zhong-bin,YANG Jing,WANG Sheng-qi.Preparation of an universe normalization control for cDNA microarray and its application in the sensitivity analysis of cDNA microarray[J].Letters in Biotechnology,2002,13(5):334-337. |
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| Authors: | CHEN Zhong-bin YANG Jing WANG Sheng-qi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cDNA microarray gene expression profiling normalization control luciferase detection sensitivity |
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