| 摘 要： | 目的建立检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein,简称E4F4)纯度的分子排阻高效液相色谱法(size exclusion high performance liquid chromatography, SEC-HPLC),并对该方法进行验证。方法使用Waters 515系列高效液相色谱仪,利用TSK G2000SW_(XL)色谱柱检测E4F4的纯度,并从系统适应性、专属性、重复性和中间精密度进行验证,同时使用20、50、100 mmol/L磷酸盐缓冲液的流动相对样品进行了6次纯度检测。结果空白溶剂在目标峰积分范围内无干扰峰;专属性验证表明样品与阴性对照分离度良好;6次重复进样目标峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.49%,保留时间RSD为0.11%;中间精密度分析目标峰面积RSD为0.47%,保留时间RSD为0.48%;使用不同盐浓度(20～100 mmol/L PBS, pH 6.8)的流动相对样品进行6次纯度检测后,各样品纯度均大于99.0%,目标峰面积RSD为0.53%,保留时间RSD为0.76%。结论经验证,建立的SEC-HPLC法各项指标均符合要求,可用于E4F4的纯度检测。
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