| 一种新型巴斯德毕赤酵母表达载体的构建及甘露聚糖酶的表达 |
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| 引用本文： | 黄生平,汪昌丽,马立新.一种新型巴斯德毕赤酵母表达载体的构建及甘露聚糖酶的表达[J].生物技术通讯,2007,18(2):220-223. |
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| 作者姓名： | 黄生平 汪昌丽 马立新 |
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| 作者单位： | 湖北大学,生命科学学院分子微生物与基因工程研究室,湖北,武汉,430062 |
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| 摘 要： | 目的:构建以带自身启动子的蔗糖转化酶基因(suc2)为选择标记的载体,用于外源基因在巴斯德毕赤酵母中的正确分泌表达。方法:根据已发表的蔗糖转化酶基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术,以啤酒酵母INVSC1总DNA为模板,扩增出包含自身启动子和终止区序列的suc2基因。将该基因与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了以suc2为选择标记的表达载体pPIC12K。将甘露聚糖酶基因man克隆入载体pPIC12K,用PEG/LiCl法转化毕赤酵母GS115菌株。以蔗糖为惟一碳源筛选转化子,利用底物平板检测筛选到的转化子中man基因的表达,并对重组表达菌株进行连续传代实验。结果:部分转化子周围产生明显的水解圈,证明甘露聚糖酶已经得到分泌表达;对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的遗传稳定性。结论:以带自身启动子的suc2基因为选择标记的表达载体构建成功,并且这个新型表达载体能够对外源基因进行稳定有效的分泌表达。
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| 关 键 词： | 巴斯德毕赤酵母 表达载体 蔗糖转化酶基因 甘露聚糖酶 表达 |
| 文章编号： | 1009-0002（2007）02-0220-04 |
| 修稿时间： | 2006-07-24 |
Construction of a Novel Pichia Expression Vector and Expression of Mannanase in Pichia pastoris |
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| HUANG Sheng-ping,WANG Chang-li,MA Li-xin.Construction of a Novel Pichia Expression Vector and Expression of Mannanase in Pichia pastoris[J].Letters in Biotechnology,2007,18(2):220-223. |
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| Authors: | HUANG Sheng-ping WANG Chang-li MA Li-xin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pichia pastoris expression vector suc2 mannanase expression |
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