稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白细胞的构建 |
| |
作者姓名: | 黄文波 刘振卫 周荣 李潇 曾军 李小锋 苏晓波 |
| |
作者单位: | 广州医科大学生命科学学院,医学遗传学与细胞生物学教研室,广州511436;广州呼吸疾病研究所呼吸疾病国家重点实验室广州医科大学,广州,510230;广东和信健康科技有限公司,广州,510663 |
| |
摘 要: | 获得稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞株。采用RT-PCR方法扩增乙型流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建pcDNA3.1(+)-HA重组质粒。将已鉴定正确的pcDNA3.1(+)-HA质粒与辅助质粒PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro通过脂质体介导法共转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选后得到重组细胞株HEK293-HA,通过流式细胞术法(FCM)来检测细胞中HA的表达情况。所得到的重组细胞经扩大培养后再连续培养15代,采用间接免疫荧光法(IFA)和蛋白免疫印迹法(WB)来检测HA蛋白表达的稳定性。结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-HA经双酶切及测序鉴定正确;共获得3株高表达阳性细胞株。细胞扩大培养后连续传代培养15代后进行Western blot和IFA检测结果表明,重组细胞的HA蛋白得到稳定的表达。已成功获得了能稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞,可为乙型流感病毒HA蛋白的进一步研究提供良好的基础。
|
关 键 词: | 乙型流感病毒 血凝素(HA)蛋白 细胞株 |
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录! |
|