基因工程α-半乳糖苷酶的制备及其性质研究 |
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作者姓名: | 高新 杨军 李素波 刘泽澎 章扬培 |
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作者单位: | 军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850 |
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摘 要: | 在获得可分泌表达α 半乳糖苷酶基因工程毕赤酵母菌株的基础上 ,尝试了基因工程α 半乳糖苷酶在 5L发酵罐中的表达以及从发酵液中纯化α 半乳糖苷酶的研究。在 4L无机盐培养基中接种 0 .4LpPIC9K Gal GS115培养物 ,最终得到 3 .5L发酵液。离心所得上清中总蛋白含量为 2 .1g L。根据发酵液中目的蛋白含量高、杂质少等特点 ,设计了如下的纯化流程 :离心→超滤→阳离子交换层析→脱盐→浓缩。纯化后电泳银染结果呈单一蛋白带 ,总回收率 41%。通过测定米氏常数等生化性质对重组酶进行鉴定后 ,完成了人B型红细胞的酶解实验。结果表明 ,从发酵液中纯化的α 半乳糖苷酶可将B型红细胞改造成O型红细胞。本研究同时在数量和质量上为α 半乳糖苷酶在众多领域的广泛应用奠定了基础。
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关 键 词: | α-半乳糖苷酶 发酵 纯化 血型改造 |
文章编号: | 1000-3061(2003)02-0223-04 |
修稿时间: | 2002-09-12 |
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