| 甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化 |
| |
| 引用本文： | 黄保英,王文玲,王秀平,蒋涛,谭文杰,阮力.甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化[J].病毒学报,2011,27(1):50-57. |
| |
| 作者姓名： | 黄保英 王文玲 王秀平 蒋涛 谭文杰 阮力 |
| |
| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,病毒病应急技术中心,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,病毒病应急技术中心,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,病毒病应急技术中心,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,病毒病应急技术中心,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,病毒病应急技术中心,北京,100052;中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,病毒病应急技术中心,北京,100052 |
| |
| 基金项目： | 国家863计划资助(2006AA02A203) |
| |
| 摘 要： | 为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因NPwt及非融合的按大肠杆菌优势密码子改造的基因NP(O)分别插入原核表达载体pET-30a,构建了表达3种形式NP基因的3种原核表达质粒并研究不同质粒中NP蛋白的表达形式、条件、纯化工艺及抗原性。限制性酶切反应与测序表明,三种形式的NP基因均正确插入原核表达质粒pET-30a;SDS-PAGE凝胶电泳显示,三种形式的NP基因均能在大肠杆菌中表达,NP(O)基因的表达量最高;在不同温度诱导条件下,NP蛋白呈现可溶性表达,NP(O)基因可溶性高效表达的条件为:T=25℃,t=10 h;经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化,可溶性表达的NP蛋白纯度可达90%;Western blot检测显示,纯化的NP能与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染小鼠的血清发生特异性结合。这些结果表明,非融合表达的密码子优化甲型流感病毒NP蛋白能在大肠杆菌中高效表达和纯化,同时保持良好的免疫反应活性。
|
| 关 键 词： | 甲型流感病毒 核蛋白 原核系统 密码子优化 蛋白质表达 |
Efficient Soluble Expression and Purification of Influenza A Nucleoprotein in Escherichia coli |
| |
| HUANG Bao-ying,WANG Wen-ling,WANG Xiu-ping,JIANG Tao,TAN Wen-jie,RUAN Li.Efficient Soluble Expression and Purification of Influenza A Nucleoprotein in Escherichia coli[J].Chinese Journal of Virology,2011,27(1):50-57. |
| |
| Authors: | HUANG Bao-ying WANG Wen-ling WANG Xiu-ping JIANG Tao TAN Wen-jie RUAN Li |
| |
| Institution: | HUANG Bao-ying,WANG Wen-ling,WANG Xiu-ping,JIANG Tao,TAN Wen-jie,RUAN Li(National Institute for Viral Disease Control and Prevention,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Beijing 100052,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | influenza A virus nucleoprotein prokaryotic system codon optimization protein expression |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
