| RT-PCR检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数 |
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| 引用本文： | 林福来,周洪波,郑甲,郭宁,吴俊子,吴丽双.RT-PCR检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数[J].生物加工过程,2014(5):46-50. |
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| 作者姓名： | 林福来 周洪波 郑甲 郭宁 吴俊子 吴丽双 |
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| 作者单位： | 中南大学资源加工与生物工程学院;中南大学生物冶金教育部重点实验室; |
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| 基金项目： | 湖南省自然科学省市联合基金(13JJ9002);湖南省研究生科研创新项目(CX2012B124);湖南省科学技术厅科技计划重点项目(2012XK4081) |
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| 摘 要： | 利用荧光定量PCR方法检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因(man)拷贝数。以毕赤酵母中高度保守基因三磷酸甘油醛脱氢酶基因(gap)为内参基因,分别构建含有gap和man的克隆质粒,进行RT-PCR反应构建gap和man双标准曲线;获得的双标准曲线具有良好的重复性,其相关系数(R2)均为0.999,其扩增效率分别为105.1%和102.2%。提取含有外源man基因的毕赤酵母基因组进行RT-PCR检测,通过双标准曲线计算出外源man基因的拷贝数。结果显示:预先经过博莱霉素(Zeoicn)抗性筛选得到的10株毕赤酵母重组菌株中含有1、2、3、4、5和7个不等拷贝的β-甘露聚糖酶基因。结果表明该方法能够高效快速筛选和鉴定出含有不同外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数的毕赤酵母重组菌株。
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| 关 键 词： | 实时荧光定量PCR 毕赤酵母 基因拷贝数 β-甘露聚糖酶 |
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