u-PA/t-PA嵌合型纤溶酶原激活剂(ut-PA)的构建、表达、纯化和性质研究 |
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引用本文: | 孙天霄,李夏军,徐长法.u-PA/t-PA嵌合型纤溶酶原激活剂(ut-PA)的构建、表达、纯化和性质研究[J].中国生物化学与分子生物学报,1997,13(6):637-643. |
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作者姓名: | 孙天霄 李夏军 徐长法 |
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作者单位: | 北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室 |
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摘 要: | 将尿激酶原(pro-UK)cDNA和组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)A链cDNA克隆到M13mp18中,经过二次寡核甘酸诱导的大片段定点删除和一次寡核苷酸诱导的多位点突变,得到u-PA(Leu144-Gly408)/t-PA(Ser1-Thr263)(ut-PA)融合基因.将ut-PA融合基因克隆到表达载体pCM-βneo中,与pCM-dhfr共转染CHO/DHFR-细胞,筛选稳定表达株.收集无血清表达上清,经苯甲脒柱纯化得到ut-PA纯品,SDS-PAGE和纤维蛋白自显影显示ut-PA有两种分子量形式,分子量分别为68kD和61kD.纤维蛋白亲和性试验表明,LUK(低分子量尿激酶)对纤维蛋白没有亲和性,而含有LUK的ut-PA则对纤维蛋白表现出很强的亲和性,但ut-PA的亲和性略低于亲本t-PA.
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关 键 词: | ut-PA嵌合蛋白 构建 表达 纤维蛋白亲和性 |
收稿时间: | 1997-12-20 |
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