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| 木聚糖酶EvXyn11TS耐热性与其N端二硫键的相关性分析 | |
| 引用本文： | 闵柔,李剑芳,高树娟,张慧敏,吴静,邬敏辰.木聚糖酶EvXyn11TS耐热性与其N端二硫键的相关性分析[J].微生物学报,2013,53(4):346-353. |
| 作者姓名： | 闵柔 李剑芳 高树娟 张慧敏 吴静 邬敏辰 |
| 作者单位： | 1. 江南大学药学院,无锡,214122 2. 江南大学食品学院,无锡,214122 3. 江南大学无锡医学院,无锡,214122 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(31101229) |
| 摘 要： | 目的]以糖苷水解酶11家族耐热木聚糖酶EvXyn11TS为研究对象,定点突变其编码基因Syxyn11,揭示EvXyn11TS耐热性与其N端二硫键的相关性.方法]对不同来源的、与EvXyn11TS一级结构相似度较高的若干11家族木聚糖酶进行多序列同源比对,发现只有耐热的EvXyn11TS在其N端存在一个二硫键(Cys5-Cys32)；运用分子动力学模拟预测该N端二硫键存在与否对木聚糖酶热稳定性的影响.以人工合成的Syxyn11为母本,采用PCR技术将其编码Cys5的密码子TGT突变为编码Thr5的ACT,构建去除了N端二硫键的突变酶(EvXyn11M)的编码基因Syxyn11M；分别将Syxyn11和Syxyn11M在毕赤酵母GS115中进行表达,并分析表达产物EvXyn 11 TS和EvXyn11M的温度和pH特性.结果]酶学性质研究结果表明:EvXyn11M的最适温度Topt由突变前的85℃降至70℃;EvXyn11TS在90℃的半衰期t1/290为32 min,而EvXyn11M在70℃的半衰期t1/270仅为8.0 min.结论]运用分子动力学模拟预测了N端二硫键对EvXyn11TS耐热性的重要作用,并通过定点突变验证之,为其它与耐热EvXyn11TS一级结构相似的、11家族常温高比活性木聚糖酶的耐热性改造提供了新的技术策略. |
| 关 键 词： | 木聚糖酶 耐热性 N端二硫键 分子动力学模拟 定点突变 |
| 收稿时间： | 2012/11/20 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/1/17 0:00:00 |
Correlation between thermostability of the xylanase EvXyn11TS and its N-terminal disulfide bridge |
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| Rou Min,Jianfang Li,Shujuan Gao,Huimin Zhang,Jing Wu and Minchen Wu.Correlation between thermostability of the xylanase EvXyn11TS and its N-terminal disulfide bridge[J].Acta Microbiologica Sinica,2013,53(4):346-353. | |
| Authors: | Rou Min Jianfang Li Shujuan Gao Huimin Zhang Jing Wu and Minchen Wu |
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