| 疏水性ELP基因设计与基因库构建 |
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| 引用本文： | 林衡,李军明,张立超,葛高顺,许崇波,胡学军.疏水性ELP基因设计与基因库构建[J].微生物学通报,2013,40(4):584-592. |
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| 作者姓名： | 林衡 李军明 张立超 葛高顺 许崇波 胡学军 |
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| 作者单位： | 1. 大连大学 生命科学与技术学院 辽宁 大连 116622;大连大学 医学院 辽宁 大连 116622
2. 大连大学 医学院 辽宁 大连 116622 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 31070822); 辽宁省教育厅高校科研计划项目(No. L2010015) |
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| 摘 要： | 目的]设计合成疏水性类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)基因,建立ELP基因库.方法]选择疏水性最强的异亮氨酸(I1e,I)(疏水参数:4.5)取代ELP五肽重复序列单元(缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸-客座氨基酸-甘氨酸,VPGXG)中客座残基X.全基因合成一段含编码(VPGIG)10序列,上游含Dra Ⅲ酶切位点、下游含BglⅠ酶切位点的ELP单元.将Dra Ⅲ和BglⅠ设计为一对同尾酶(Isocaudarner),利用这对同尾酶定向克隆(Recursive directional ligation,RDL)一系列不同拷贝数的ELP基因.为鉴定基因库有效性,随机选取库中ELPⅠ]50基因进行蛋白表达、纯化并测定其相变温度(Inverse temperature transition,Tt).结果]建立了ELPⅠ]n(n=10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120)基因库.测定ELPⅠ]50的Tt为24.3℃.结论]首次单独选用I1e(I)作为ELP蛋白质标签中客座残基氨基酸,增加了ELP中疏水性氨基酸的含量,为进一步筛选出表达量高、Tt低、分子量小的ELP标签奠定基础.
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| 关 键 词： | 类弹性蛋白 异亮氨酸 同尾酶 定向克隆 |
Design and construction of hydrophobic ELP genes library |
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| LIN Heng,LI Jun-Ming,ZHANG Li-Chao,GE Gao-Shun,XU Chong-Bo and HU Xue-Jun.Design and construction of hydrophobic ELP genes library[J].Microbiology,2013,40(4):584-592. |
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| Authors: | LIN Heng LI Jun-Ming ZHANG Li-Chao GE Gao-Shun XU Chong-Bo and HU Xue-Jun |
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| Institution: | 1. College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian, Liaoning 116622, China 2. Medical College, Dalian University, Dalian, Liaoning 116622, China;2. Medical College, Dalian University, Dalian, Liaoning 116622, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Elastin-like protein Ile Isocaudarner Recursive directional ligation |
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