烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达

利用RT-PCR技术从烟实夜蛾Helicoverpa assulta (Hass) 雄虫触角中扩增得到了信息素结合蛋白3(Hass PBP3)。克隆和测序结果表明，该基因核苷酸序列全长495 bp，编码164个氨基酸残基，预测分子量18.5 kD。并预测N-末端疏水区包含由22个氨基酸组成的信号肽。因此，成熟蛋白应包括142个氨基酸，预测分子量为16.1 kD，等电点为5.44。经氨基酸序列同源性分析发现，此序列与已知昆虫PBP3有较高的同源性，而且具有气味结合蛋白的典型特征。将该基因重组到表达载体pGEX-4T-2中进行原核表达。经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western印迹检测，结果表明烟实夜蛾PBP3基因能在大肠杆菌BL21中表达，电泳检测到一条大约42 kD的外源蛋白，与预测的融合蛋白分子量相符。