HP1α在Zmpste24-缺陷早老小鼠胚胎成纤维细胞中表达和磷酸化水平升高 |
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作者姓名: | 刘佳 周光前 尹献辉 刘宝华 郑慧玲 李雪芹 王优雅 王子梅 |
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作者单位: | 深圳大学医学院;四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室;香港大学李嘉诚医学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(No.81070270);深圳市科技基金基础研究计划面上项目(No.JC201005280552A)~~ |
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摘 要: | 本实验旨在研究异染色质蛋白1(heterochromatin protein 1, HP1)在Zmpste24基因敲除早老小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs)中的表达量和磷酸化水平,探索异染色质功能异常与早老发病机制的内在联系.首先取雄雌Zmpste24杂合子小鼠胚胎,原代培养MEFs;分别用PCR和Western 印迹检测MEFs基因型和A型核纤层蛋白(laminA)表达以区分野生型与Zmpste24-缺陷型早老细胞;用与衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法 (senescence associated-β-galactosidase assay, SA-β-gal)确定早老细胞出现衰老表型的传代数.用Western 印迹和phos-tag Western 印迹分别检测HP1在Zmpste24+/+和Zmpste24-/- MEFs中表达量和磷酸化水平的差异.实验结果显示,Zmpste24-/- MEFs中存在异常的LaminA,且在传代培养第5代出现明显的细胞衰老现象.选用培养至第3代或第4代的MEFs细胞进行下述实验发现,Zmpste24-/-MEFs中HP1α表达量明显高于Zmpste24+/+ MEFs,而HP1β未发现明显升高;Zmpste24+/+ MEFs中HP1α以非磷酸化状态为主,但在Zmpste24-/- MEFs中磷酸化HP1α比例明显升高;2种细胞中均未检测到磷酸化HP1β. 本研究结果证明,HP1α在Zmpste24-缺陷型早老小鼠传代早期MEFs中的表达量和磷酸化水平均有升高,提示HP1α参与A型核纤层蛋白相关的早老小鼠发病机制.
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关 键 词: | 异染色质蛋白1(HP1) A型核纤层蛋白 早老症 小鼠胚胎成纤维细胞 蛋白质磷酸化 |
收稿时间: | 2012-03-14 |
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