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| 基于烟草瞬时表达体系对amiRNA沉默效果快速有效的预验证 | |
| 引用本文： | 王健.基于烟草瞬时表达体系对amiRNA沉默效果快速有效的预验证[J].植物科学学报,2015,33(6):819-828. |
| 作者姓名： | 王健 |
| 作者单位： | 1. 安康学院农学与生命科学学院, 陕西安康 725000; 2. 教育部药用植物资源与天然药物化学重点实验室和 西北濒危药材资源开发国家工程实验室, 陕西师范大学生命科学学院, 西安 710062 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(31170281,31270338);陕西省自然科学基金(2011K-16-02-01);安康学院高层次人才科研启动基金(AYQDZR200926)。 |
| 摘 要： | amiRNA(artificial microRNA)作为一种诱导基因发生特异性沉默的技术已在多种植物中应用,但设计出的不同amiRNAs在所转化株系中的沉默效率难以预测,因此对amiRNA载体的沉默效率进行预验证是非常必要的。本实验以丹参(Salvia miltiorrhiza)的1个MYB类转录因子基因SmPAP1的mRNA序列为amiRNA作用对象,并挑选2个经在线软件WMD3(Web MicroRNA Designer)设计的amiRNAs,分别命名为amiRNA1-SmPAP1和amiRNA2-SmPAP1,然后通过农杆菌介导将构建的2个amiRNA载体和SmPAP1过表达植物载体在烟草叶片细胞中进行瞬时共表达。结果显示,amiRNA2的表达丰度约是amiRNA1的2倍;amiRNA2对靶标SmPAP1的沉默效率约是amiRNA1的2.5倍;SmPAP1在mRNA和蛋白水平上均与相应amiRNA的表达水平呈显著负相关。因此,amiRNA在烟草细胞中的瞬时表达可快速、有效地对不同amiRNA沉默效果进行预验证,从而为后续的植物遗传转化研究提供重要参考。 |
| 关 键 词： | 人工microRNA 瞬时表达 基因沉默效率 |
| 收稿时间： | 2015-06-10 |
Rapid and Effective Pre-validation of amiRNA Silencing Strength by Transient Expression in Nicotiana benthamiana |
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| WANG Jian.Rapid and Effective Pre-validation of amiRNA Silencing Strength by Transient Expression in Nicotiana benthamiana[J].Plant Science Journal,2015,33(6):819-828. | |
| Authors: | WANG Jian |
| Institution: | 1. College of Agriculture and Life Science, Ankang University, Ankang, Shaanxi 725000, China; 2. Key Laboratory of Ministry of Education for Medicinal Resources and Natural Pharmaceutical Chemistry, National Engineering Laboratory for Resource Developing of Endangered Chinese Crude Drugs in Northwest China, College of Life Sciences, Shaanxi Normal University, Xi'an 710119, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Artificial microRNA Transient expression Gene silencing efficiency |
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