油菜叶绿体基因组同源重组片段的克隆及phb基因定点整合载体的构建 |
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引用本文: | 张中林,李轶女,苏宁,沈桂芳,张景昱,宋艳茹. 油菜叶绿体基因组同源重组片段的克隆及phb基因定点整合载体的构建[J]. 植物生理与分子生物学学报, 2001, 27(3): 235-242 |
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作者姓名: | 张中林 李轶女 苏宁 沈桂芳 张景昱 宋艳茹 |
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作者单位: | 1. 中国农业科学院生物技术研究所, 2. 中国科学院植物研究所, |
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摘 要: | 利用叶绿体基因组在进化过程中高度保守的特点,根据烟草、水稻和玉米叶绿体基因组全序列资料,设计合成引物,PCR扩增并克隆了油菜叶绿体两个重要的功能基因rbcL和atpB(GenBank登录号分别为AF267640和AF267641),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以来自叶绿体的强启动子PpsbA和Prrn等驱动PHB合成途径中3个关键酶基因phbA、phbB和phbC,分别构建表达盒,并将它们按照其在原始菌株中的自然转录顺序phbC-phbA-phbB相串联,最后连同选择标记基因aadA表达盒一起,克隆到油菜叶绿体同源片段中,构建成phb基因定点整合载体pRCABZ和pRCABF。酶切及Southern杂交结果证明所构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工作目前正在进行之中。
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关 键 词: | phb基因,叶绿体转化,同源片段,定点整合,油菜 |
修稿时间: | 2000-07-21 |
Cloning of Homologous Targeting Sequences Containing Chloroplast Genes, rbcL and atpB, of Brassica napus and the Construction of Plastid Transformation Vectors Harboring Key Enzyme Genes Responsible for PHB Biosynthesis |
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Abstract: | |
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Keywords: | phb genes chloroplast transformation homologous targeting sequence site-specific integration Brassica napus |
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