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| Smad4基因siRNA表达载体的构建与鉴定 | |
| 引用本文： | 何云武,张彩平,龙石银,王思远,崔慧辉,雷小勇.Smad4基因siRNA表达载体的构建与鉴定[J].现代生物医学进展,2009,9(6). |
| 作者姓名： | 何云武 张彩平 龙石银 王思远 崔慧辉 雷小勇 |
| 作者单位： | 1. 南华大学生命科学与技术学院药物药理研究所;南华大学附二医院 2. 南华大学生物技术系,湖南,衡阳,421001 3. 南华大学生命科学与技术学院药物药理研究所 |
| 基金项目： | 湖南省卫生厅中医药局科研基金,湖南省教育厅青年基金 |
| 摘 要： | 目的:以Smad4基因为靶标构建小干扰RNA(siRNA)真核表达载体.方法:根据GenBank公布的人Smad4核酸序列及SiRNA设计原则,用AmbionRNAi在线软件,筛选得到2个19 bp片段为靶序列,合成两端带有Bam H Ⅰ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆到真核表达质粒pSilencerTM3.1-H1 neo vector中,构建成重组质粒,酶切及测序验证.脂质体介导转染人原代增生性瘢痕成纤维细胞,经G418筛选细胞克隆,并用RT-PCR检测Smad4基因的表达.结果:成功构建了pSilencerTM3.1.H1 neo-Smad4 shRNA表达载体克隆,插入片段测序结果与合成的siRNA序列一致.RT-PCR结果显示转染shRNA1、shRNA2重组质粒的成纤维细胞内Smad4 mRNA水平均降低,其中以pSilencerTM3.1-H1-Smad4 shRNA1更为明显(P＜0.01).结论:构建P-Smad4 shRNA袁达载体成功,为进一步研究Smad4基因的RNA干扰奠定了基础. |
| 关 键 词： | RNA干扰 Smad4 基因克隆 成纤维细胞 转化生长因子β |
Construction and Identification Of a Eukaryotic Expression Vector for Small Interfering RNA Targeting Smad4 Gene |
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| HE Yun-wu,ZHANG Cai-pin,LONG Shi-yin,WANG Si-yuan,CUI Hui-Hui,LEI Xiao-yong.Construction and Identification Of a Eukaryotic Expression Vector for Small Interfering RNA Targeting Smad4 Gene[J].Progress in Modern Biomedicine,2009,9(6). | |
| Authors: | HE Yun-wu ZHANG Cai-pin LONG Shi-yin WANG Si-yuan CUI Hui-Hui LEI Xiao-yong |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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