| 游仆虫Rab家族成员Eorab1f基因的克隆、表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 智慧,柴宝峰,梁爱华,王伟.游仆虫Rab家族成员Eorab1f基因的克隆、表达及多克隆抗体制备[J].动物学报,2005,51(2):314-319. |
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| 作者姓名： | 智慧 柴宝峰 梁爱华 王伟 |
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| 作者单位： | 山西大学生物技术研究所,化学生物学与分子工程教育部重点实验室,太原,030006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目 (No. 30270204，No. 30300038 )，山西省自然科学基金项目 (No. 20041033) 资助~~ |
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| 摘 要： | Rab家族蛋白在真核细胞囊泡转运过程中起关键作用。为进一步研究该家族成员的功能, 本研究从八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus) 大核基因组中克隆得到Rab蛋白家族中一个新Rab蛋白基因(命名为Eorab1f)的编码区。该开放读框长624 bp, 含有两个通用终止密码子TGA。通过定点突变将TGA突变为TGC。突变后的Eorab1f克隆入原核表达载体pRSETc 中, 工程菌E coli BL21 (DE3) /pRSETc Eorab1f 经IPTG诱导表达,SDS- PAGE分析表明, 有一分子量约为26 kD的特异蛋白条带出现。表达产物经IMAC金属螯合亲和层析及Re source- Q阴离子交换层析纯化, 获得电泳纯的蛋白。Brandford法检测表明每升发酵液中可获得纯化的目的蛋白1 353 mg。Western blotting印迹分析表明该蛋白为融合有6个His的Eorab1f蛋白。纯化的Eorab1f融合蛋白免疫大鼠制备多克隆抗体, ELISA法测得抗体效价为1∶5 000。用制备的多克隆抗体检测八肋游仆虫的蛋白提取物,表明Eorab1f蛋白在游仆虫细胞内表达, 同时表明所得的多克隆抗体特异性良好。
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| 关 键 词： | 游仆虫 Eorab1f蛋白基因 表达 纯化 多克隆抗体 |
Cloning and expression of Eorab1f from Euplotes and preparation of its polyclonal antibody |
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| ZHI Hui,CHAI Bao-Feng,LIANG Ai-Hua,WANG Wei.Cloning and expression of Eorab1f from Euplotes and preparation of its polyclonal antibody[J].Acta Zoologica Sinica,2005,51(2):314-319. |
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| Authors: | ZHI Hui CHAI Bao-Feng LIANG Ai-Hua WANG Wei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Euplotes Eorab1f Expression Purification Polyclonal antibody |
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