| 融合自组装双亲短肽对重组过氧化氢酶酶学性质的影响 |
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| 引用本文： | 庞焦,姜梦彤,刘羽欣,李明玉,王从纲,李宪臻.融合自组装双亲短肽对重组过氧化氢酶酶学性质的影响[J].微生物学报,2022,62(9):3449-3463. |
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| 作者姓名： | 庞焦 姜梦彤 刘羽欣 李明玉 王从纲 李宪臻 |
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| 作者单位： | 大连工业大学生物工程学院, 辽宁 大连 116034 |
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| 基金项目： | 辽宁省自然科学基金项目(20180550668) |
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| 摘 要： | 目的]利用融合自组装双亲短肽策略对源自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的过氧化氢酶KatA进行改性,以强化重组过氧化氢酶在工业中的应用适应性。方法]将自组装双亲短肽S1vw通过连接肽PT-linker融合在KatA的N端,构建重组质粒pHT254-S1vw-PT-katA,将其与携带天然酶基因的pHT254-katA分别转入枯草芽孢杆菌WB800N中进行分泌表达,之后将分离纯化得到的纯酶进行酶学性质研究。结果]成功构建出工程菌并将胞外粗酶液通过乙醇沉淀、DEAE阴离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤层析4步纯化,最终获得电泳纯的重组酶蛋白。酶学性质研究结果显示,融合酶S1vw-PT-KatA和天然酶KatA的最适反应温度均为30℃,最适反应pH值均为11.0。然而,融合酶在pH 12.0下孵育30 min的相对酶活为77.3%,是相同处理条件下天然酶相对酶活的14.9倍,在65℃和70℃下孵育30 min的相对酶活分别为19.8%和17.5%,是相同处理条件下天然酶相对酶活的1.8倍和1.7倍。此外,融合酶在4℃储存14 d后相对酶活为88.6%,而天然酶仅具有44.3%的相对酶活。同时,融合酶的kcat/Km提高到天然酶的2.3倍。结论]融合自组装双亲短肽S1vw提高了重组过氧化氢酶KatA的pH稳定性、温度稳定性、储存稳定性和催化效率,不仅获得了催化效率和应用适应性改良的重组酶蛋白,为针对过氧化氢酶的进一步分子改造提供了策略参考和实验依据,而且促进了其在工业上的规模化制备和应用。
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| 关 键 词： | 过氧化氢酶 融合表达 自组装双亲短肽 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2022/1/8 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/2/28 0:00:00 |
Effect of fusing a self-assembling amphipathic peptide on the enzymatic properties of recombinant catalase |
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| PANG Jiao,JIANG Mengtong,LIU Yuxin,LI Mingyu,WANG Conggang,LI Xianzhen.Effect of fusing a self-assembling amphipathic peptide on the enzymatic properties of recombinant catalase[J].Acta Microbiologica Sinica,2022,62(9):3449-3463. |
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| Authors: | PANG Jiao JIANG Mengtong LIU Yuxin LI Mingyu WANG Conggang LI Xianzhen |
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| Institution: | School of Biological Engineering, Dalian Polytechnic University, Dalian 116034, Liaoning, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | catalase fusion expression self-assembling amphipathic peptide enzymatic properties |
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