| 利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体 |
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| 引用本文： | 辛艳丽,贾玉艳,王恒梁,邓继先.利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体[J].中国生物工程杂志,2005,25(8):45-50. |
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| 作者姓名： | 辛艳丽 贾玉艳 王恒梁 邓继先 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院生物工程研究所, 北京 100071;
2. 西北农林科技大学, 杨凌 712100 |
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| 基金项目： | 国家“863”计划资助项目(2002AA206621) |
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| 摘 要： | 采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除。经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1BAC克隆。
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| 关 键 词： | 细菌人工染色体 λRed重组系统 β-酪蛋白基因 FLP |
| 收稿时间： | 2005-01-27 |
| 修稿时间： | 2005-06-15 |
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