肠道病毒71型外壳蛋白VPl在Pichia pastoris酵母中的表达

利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增肠道病毒7l型(EV71)外壳蛋白VPl基因，经序列测定证实后，构建重组表达质粒pPIC9K／VPl，转化Pichia pastoris酵母宿主菌GS115，甲醇诱导表达。SDS-PAGE分析显示：表达产物的分子量约为34kD，与天然VPl大小一致。凝胶薄层扫描分析显示：目的蛋白表达量占培养上清总蛋白的60％以上。ELISA实验表明，重组蛋白VPl具有较好的抗原性。使用饱和硫酸铵分级沉淀法初步纯化的表达产物，能够较特异性地与EV7l感染者血清中的抗体产生反应，而且与抗柯萨奇病毒A16特异性抗体不产生反应。通过利用表达产物作为抗原，对156份血清的检测初步证实，重组蛋白VPl可以作为检测EV7l感染的的检测用抗原。