| 猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救 |
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| 引用本文： | 李俊,时建立,于周,徐绍建,丁鹏,程凯慧,王金宝. 猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救[J]. 生物工程学报, 2009, 25(11): 1633-1638 |
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| 作者姓名： | 李俊 时建立 于周 徐绍建 丁鹏 程凯慧 王金宝 |
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| 作者单位： | 1. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南,250100
2. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南,250100;青岛农业大学,青岛,266109 |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金(No.Y2006D23);;“十一五”国家科技支撑计划(No.2006BAD06A18)资助~~ |
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| 摘 要： | 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。
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| 关 键 词： | 猪圆环病毒2型 单拷贝 双拷贝 自身环化 感染性克隆 体外拯救 |
| 收稿时间： | 2009-07-04 |
Rescue of porcine circovirus type 2 from cloned DNA |
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| Jun Li,Jianli Shi,Zhou Yu,Shaojian Xu,Peng Ding,Kaihui Cheng and Jinbao Wang. Rescue of porcine circovirus type 2 from cloned DNA[J]. Chinese journal of biotechnology, 2009, 25(11): 1633-1638 |
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| Authors: | Jun Li Jianli Shi Zhou Yu Shaojian Xu Peng Ding Kaihui Cheng Jinbao Wang |
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| Affiliation: | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China;Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China;Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China; Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China;Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China;Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China; Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China;Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China; Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China;Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine circovirus type 2 single copy double copy cyclization infectious clones virus rescue |
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