| 家蚕Bmyan基因的克隆表达和作为microRNA 7靶基因的验证 |
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| 引用本文： | 刘仕平,黄亚玺,尹纪云,吴小燕,周兰庭,王伟,夏庆友. 家蚕Bmyan基因的克隆表达和作为microRNA 7靶基因的验证[J]. 生物工程学报, 2015, 31(11): 1612-1622 |
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| 作者姓名： | 刘仕平 黄亚玺 尹纪云 吴小燕 周兰庭 王伟 夏庆友 |
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| 作者单位： | 家蚕基因组生物学国家重点实验室 西南大学，重庆 400716,家蚕基因组生物学国家重点实验室 西南大学，重庆 400716,家蚕基因组生物学国家重点实验室 西南大学，重庆 400716,家蚕基因组生物学国家重点实验室 西南大学，重庆 400716,家蚕基因组生物学国家重点实验室 西南大学，重庆 400716,家蚕基因组生物学国家重点实验室 西南大学，重庆 400716,家蚕基因组生物学国家重点实验室 西南大学，重庆 400716 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31071136)，重庆市基础与前沿研究计划 (No. cstc2014jcyjA00025)，国家重点基础研究发展计划 (973计划) (No. 2012CB114602) 资助。 |
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| 摘 要： | microRNAs(miRNAs)是一类长约22 nt的非编码RNA,通过与其靶基因3′端非翻译区(3′-UTR)的结合来调节各项生命活动。克隆表达家蚕Bmyan基因,验证其是否是bmo-miR-7的靶基因对于深入研究家蚕变态发育机制有重要意义。基于同源性检索和PCR扩增,克隆了家蚕Bmyan基因CDS全长,编码476个氨基酸。序列分析表明,家蚕YAN蛋白的氨基酸序列保守,含SAM-PNT和ETs结构域。芯片数据、RT-PCR和定量PCR的检测结果表明,Bmyan在五龄3 d的家蚕头部、体壁、卵巢中高量表达,在其余组织中低量表达或不表达。在幼虫期,Bmyan表达水平相对较低,但在上蔟期和蛹期前4 d高量表达。通过3′RACE克隆了Bmyan基因的3′-UTR。RNAhybrid在线软件预测了其3'-UTR上bmo-miR-7的两个靶位点。构建了含有Bmyan基因3′-UTR和荧光素酶报告基因的转染载体,将该载体与bmo-miR-7的mimics序列共转染到家蚕胚胎细胞系BmE中,通过测定荧光素酶的活性,证明了Bmyan基因是bmo-miR-7的靶基因。本研究为进一步揭示bmo-miR-7和Bmyan在家蚕体内的生物学功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 家蚕，Bmyan，克隆表达，microRNA 7，靶位点 |
| 收稿时间： | 2014-12-08 |
Cloning and expression profile of Bmyan in the silkworm (Bombyx mori) and experimental validation as one target of microRNA 7 |
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| Shiping Liu,Yaxi Huang,Jiyun Yin,Xiaoyan Wu,Lanting Zhou,Wei Wang and Qingyou Xia. Cloning and expression profile of Bmyan in the silkworm (Bombyx mori) and experimental validation as one target of microRNA 7[J]. Chinese journal of biotechnology, 2015, 31(11): 1612-1622 |
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| Authors: | Shiping Liu Yaxi Huang Jiyun Yin Xiaoyan Wu Lanting Zhou Wei Wang Qingyou Xia |
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| Affiliation: | Southwest University, State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Chongqing 400716, China,Southwest University, State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Chongqing 400716, China,Southwest University, State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Chongqing 400716, China,Southwest University, State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Chongqing 400716, China,Southwest University, State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Chongqing 400716, China,Southwest University, State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Chongqing 400716, China and Southwest University, State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Chongqing 400716, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | silkworm (Bombyx mori) Bmyan cloning and expression microRNA 7 target site |
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