金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究

以Sepharose CL-6B为载体，环氧氯丙烷为活化剂，羧甲基天冬氨酸（CM-Asp）为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose，并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200 μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量，Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间，介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果，开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究，并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1蛋白的纯化量。结果表明：对200μL细胞裂解液纯化体系， Co-CM-Asp-Sepharose（50%悬浮液）的优选体积为60μL，最佳孵育时间为30min，洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L，纯化得到融合蛋白的量约为200μg。介质用量放大为1.5mL（50%悬浮液）对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比，本介质具有选择性好，清洗条件简单，得到的靶蛋白纯度高等优点。