| 大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达 |
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| 引用本文： | 戴五星 陈智浩 高红 黄海浪 梁靓 程继忠 皇甫永穆. 大肠杆菌-分枝杆菌分泌型穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及人结核杆菌HSP65的表达[J]. 生物工程学报, 2004, 20(2): 170-174 |
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| 作者姓名： | 戴五星 陈智浩 高红 黄海浪 梁靓 程继忠 皇甫永穆 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目资助(No .30 370 0 75)，湖北省自然科学基金项目资助 (No .2 0 0 3ABA1 36 )~~ |
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| 摘 要： | 用PCR技术从Bacillus Calmetteguérin(BCG)基因组中扩增出抗原85B(Ag85B)的信号肽(SP)DNA序列，从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG2100的人结核杆菌HSP70启动子下游，构建成分泌型原核穿梭表达质粒(pBCGSPHSP65)。酶切鉴定、PCR和测序分析结果均表明分泌型原核穿梭表达质粒pBCGSPHSP65构建成功。利用电穿孔将该质粒转入耻垢分枝杆菌(Mycobacterial smegmatis, MS)中，用卡那霉素筛选出阳性重组子。经热诱导后用SDS-PAGE观察到在耻垢分枝杆菌中65kD蛋白占总蛋白的20%，而在重组耻垢分枝杆菌表达的65kD蛋白占菌体总蛋白的34.46%，占裂解物上清总蛋白的68.56%,表明重组的HSP65基因能在耻垢分枝杆菌中高效表达，表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Westernblot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP65的抗体特异性结合，说明该重组蛋白具有HSP65的生物学活性。
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| 关 键 词： | 信号肽， 结核杆菌HSP65， 分泌型原核穿梭表达质粒， 重组耻垢分枝杆菌 |
| 文章编号： | 1000-3061(2004)02-0170-05 |
| 修稿时间： | 2003-07-25 |
Construction of a Secreting Prokaryotic Shuttle Expressing Plasmid pBCG-SP-HSP65 and Its Expression in Mycobacterial smegmatis |
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| DAI Wu-Xing CHEN Zhi-HaoGAO Hong HUAN G Hai-LangLIANG LiangCHENG Ji_ZhongHUANGFU Yong-Mu. Construction of a Secreting Prokaryotic Shuttle Expressing Plasmid pBCG-SP-HSP65 and Its Expression in Mycobacterial smegmatis[J]. Chinese journal of biotechnology, 2004, 20(2): 170-174 |
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| Authors: | DAI Wu-Xing CHEN Zhi-HaoGAO Hong HUAN G Hai-LangLIANG LiangCHENG Ji_ZhongHUANGFU Yong-Mu |
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| Affiliation: | DAI Wu-Xing ** CHEN Zhi-HaoGAO Hong HUAN G Hai-LangLIANG LiangCHENG Ji_ZhongHUANGFU Yong-Mu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | signal peptide HSP65 of human Mycobacterium tuberc ulosis a secreting prokaryotic shuttle expressing plasmid recombinant Myco bacterial smegmatis |
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