| Thermobifida fusca角质酶突变体D204C/E253C高效可溶表达及其应用 |
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| 引用本文： | 朱方剑,王蕾,吴敬,陈晟.Thermobifida fusca角质酶突变体D204C/E253C高效可溶表达及其应用[J].基因组学与应用生物学,2021,40(2):678-685. |
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| 作者姓名： | 朱方剑 王蕾 吴敬 陈晟 |
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| 作者单位： | 江南大学,食品科学与技术国家重点实验室,无锡,214122;江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122;江南大学,教育部食品安全国际合作联合实验室,无锡,214122 |
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| 摘 要： | Thermobifida fusca角质酶突变体D204C/E253C是通过在野生型角质酶中引入二硫键获得的热稳定性突变体.由于二硫键的引入,导致突变体D204C/E253C在表达过程中,易错误折叠形成大量包涵体,可溶表达比率极低.这极大地限制了其发酵制备以及在PET纤维改性中的应用.为了加强突变体D204C/E253C的可溶表达,本研究将突变体D204C/E253C和周质蛋白二硫键氧化还原酶DsbC在大肠杆菌突变株Es-cherichia coli Origami B(DE3)中共表达,来异构化异常的二硫键.实验结果表明,共表达的角质酶突变体D204C/E253C正常折叠表达,酶活为61 U/mL,是非共表达的6.8倍;共表达的突变体D204C/E253C在80℃的半衰期可达16 h,能够在80℃对PET纤维进行改性.本研究通过与分子伴侣蛋白DsbC在大肠杆菌突变株E.coli Origami B(DE3)中的共表达,实现角质酶突变体D204C/E253C的高效可溶表达,为大规模工业应用提供了一定的理论基础.
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| 关 键 词： | 角质酶 二硫键 可溶性表达 DsbC PET纤维改性 |
Highly Soluble Expression of Thermobifida fusca Cutinase Mutant D204C/E253C and Its Application |
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| Zhu Fangjian,Wang Lei,Wu Jing,Chen Sheng.Highly Soluble Expression of Thermobifida fusca Cutinase Mutant D204C/E253C and Its Application[J].Genomics and Applied Biology,2021,40(2):678-685. |
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| Authors: | Zhu Fangjian Wang Lei Wu Jing Chen Sheng |
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