芽孢杆菌α-淀粉酶基因的克隆、表达和酶学性质分析 |
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作者姓名: | 彭平 吴襟 程安春 高启禹 张树政 |
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作者单位: | 1. 中国科学院微生物研究所,北京,100080;四川农业大学,雅安,6250143 2. 中国科学院微生物研究所,北京,100080 3. 四川农业大学,雅安,6250143 4. 中国科学院微生物研究所,北京,100080;甘肃农业大学,兰州,730070 |
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基金项目: | 中国科学院知识创新工程重要方向项目(KSCX2_SW_323)~~ |
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摘 要: | 在仔猪结肠内容物中分离出一株能利用淀粉的芽孢杆菌Bacillussp.WS06,构建了全基因组DNA文库,从中筛选出α_淀粉酶基因amyF,分析测定了其核苷酸序列并进行了表达;其中amyF编码的蛋白有526个氨基酸、分子量为58.6kD;它与已报道的Bacillusmegaterium的α_淀粉酶序列有93%的同源性。经过氨基酸序列比较分析还发现,AmyF含有淀粉酶家族中4个高度保守的酶催化活性区。经多步纯化,重组酶的比活共提高了22.2倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品;经SDS_PAGE检测,AmyF酶分子量为57kD。该酶的最适反应温度为55℃~60℃,酶的最适反应pH为7.0,在温度不超过55℃时,酶活较稳定;AmyF能迅速降解淀粉生成麦芽寡糖,属于内切糖苷酶。
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关 键 词: | 芽孢杆菌 α-淀粉酶 基因克隆和表达 酶学性质 |
文章编号: | 0001-6209(2005)06-0876-05 |
收稿时间: | 2005-03-14 |
修稿时间: | 2005-07-29 |
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