| 斑马鱼myo7ab基因敲除品系的构建 |
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| 作者单位： | 湖南师范大学动物肠道功能调控湖南省重点实验室,长沙 410081;湖南师范大学动物营养与人体健康实验室,长沙 410081;浙江大学生命科学学院细胞与发育生物学研究所,杭州 310058;中南大学湘雅二医院耳鼻咽喉科,长沙 410011;湖南师范大学动物肠道功能调控湖南省重点实验室,长沙 410081;湖南师范大学动物营养与人体健康实验室,长沙 410081;湖南师范大学淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,长沙 410081 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;湖南省自然科学基金;湖南省卫生健康委科研计划项目;湖湘高层次人才聚集工程项目;领军人才项目;省计划创新引导计划项目 |
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| 摘 要： | MYO7A是人类Usher综合征(US)的致病基因。由MYO7A突变导致的Usher综合征病例占Usher综合征1型病例的29%～55%。研究发现人类MYO7A突变能够导致Usher综合征1B型(USH1B),包括感觉神经性听力损伤及年龄依赖性视网膜色素变性(RP),但其分子机制尚不清楚。为了研究该基因在内耳及视网膜发育中的具体分子作用机制,利用Cloning free CRISPR/Cas9基因编辑技术构建斑马鱼myo7ab基因敲除品系。首先,通过分析软件筛选出该基因的敲除位点,利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增该基因的向导DNA(gDNA),再以gDNA为模板转录得到向导RNA(gRNA),将gRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼1细胞期胚胎中;随后,进行基因编辑的有效性检测。研究结果表明,CRISPR/Cas9系统对该基因的敲除有效。对其进行进一步筛选,成功获得斑马鱼myo7ab基因敲除突变品系,这为研究该基因在内耳及视网膜发育过程中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 斑马鱼 CRISPR/Cas9 myo7ab基因 内耳及视网膜发育 |
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