人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究 |
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引用本文: | 谭文斌,聂怡玲,郭小珊,谭运年,成光杰,陈汉春,朱定尔.人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究[J].中国生物化学与分子生物学报,2000,16(4):425-429. |
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作者姓名: | 谭文斌 聂怡玲 郭小珊 谭运年 成光杰 陈汉春 朱定尔 |
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作者单位: | 湖南医科大学分子生物学研究中心长沙 410078 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(39700050)和Chinese
Medical Board项目(CMB,99-689)资助。 |
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摘 要: | 人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体中 ,经序列分析证明无误 .为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域 ,用基因缺失技术从 - 1 62 ( Bst X )位点向上游分别延伸至 - 2 73( Pst )、- 339( Sma )、- 381 ( Sac )、- 44 0 ( Eco R )、- 570 ( H inc )、-853( Bgl )及 - 1 1 90 ( Xho )等位点 ,共获 7个不同长度的 h SCF基因 5′旁侧序列片段 ,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶 ( luc)报告基因载体 p GL2 - Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染 He La细胞 ,培养 48h后检测 Luc活性 .结果表明 :h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90~ - 853区域对luc表达有明显的增强作用 ,而 - 339~ - 2 73区域则显示有抑制作用 .分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验 ,结果均出现一个或多个特异性滞留区带 ,说明这两个区域存在转录因子的结合位点 .实验结果表明 ,h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90~ - 853区域富含 AT,是一典型基质结合区 ,而 - 339~ - 2 73区域为一新的沉默子 ,在
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关 键 词: | 人干细胞因子基因 基因表达调控 报告基因分析 HeLa细胞 基质结合区 沉默子 |
收稿时间: | 2000-08-20 |
修稿时间: | 1999年11月9日 |
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