HNF1α对人FXR 启动子的调控作用

为探讨肝细胞核因子1α（HNF1α）对人胆汁酸受体（FXR）转录激活的作用及机制，将含HNF1α的真核表达载体（pcDNA3.1(+)HNF1α）和含有FXR启动子的荧光素酶报告基因载体共转染人肝癌细胞系HepG2，检测转染细胞中荧光素酶活性并用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测FXR的表达.QuikChange法对FXR启动子HNF1α可能结合位点进行突变，将包含突变点的重组荧光素酶报告质粒单独或与pcDNA3.1(+)共同转染HepG2细胞，检测各组荧光素酶活性.根据凝胶电泳迁移率变化，分析HNF1α与FXR启动子区域的结合.结果发现，转染pcDNA 3.1(+)HNF1α可以上调FXR在HepG2细胞中的表达，并增强FXR启动子活性且具有剂量依赖性；－65～－48区域的点突变，导致FXR启动子活性明显降低，共转染pcDNA3.1(+)HNF1α也不具有增强作用.结果提示，转录因子HNF1α能调控FXR基因表达，其机制为：HNF1α与FXR启动子区域－65～－48区域的反向半位点结合，发挥其反式激活作用.